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液相色譜柱選擇的方法和條件

點(diǎn)擊次數(shù):1163 發(fā)布時(shí)間:2020-08-12
   液相色譜柱選擇的方法和條件
 ?、偬盍匣|(zhì)
  a.硅膠基質(zhì):純度本錢低,度大,化學(xué)修飾輕易,但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定,但經(jīng)過(guò)修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。
  b.聚合物基質(zhì):應(yīng)用pH值范圍寬,溫度穩(wěn)定(溫可以達(dá)到80度以上),機(jī)械度小。
  ②顆粒外形
  大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒,但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較的柱效和穩(wěn)定性以及較長(zhǎng)的柱壽命在使用粘度的活動(dòng)相時(shí);不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格。
 ?、垲w粒粒徑
  粒徑越小柱效越、分離度越,但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
 ?、芎剂?/div>
  含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例,與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。含碳量進(jìn)步柱容量、分辨率及分析時(shí)間,用于要求分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性,用于快速分析簡(jiǎn)單樣品及需要含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
  ⑤孔徑和比表面積
  HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒,盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此,分子必須進(jìn)進(jìn)孔內(nèi)才能被吸附和分離。
  孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念??讖叫”缺砻娣e大,反之亦然。比表面積大,增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),增加保存,上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小,平衡時(shí)間快,適合梯度分析。
  ⑥孔容和機(jī)械度
  孔容,又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能好的反應(yīng)填料的機(jī)械度??左w積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械度要略弱??左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離,而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
 ?、叻舛朔舛?/div>
  封端能夠降低性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性,尤其是性樣品。

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