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液相色譜柱清洗、活化方法概述

點(diǎn)擊次數(shù):1677 發(fā)布時(shí)間:2019-09-25
     液相色譜柱清洗、活化方法概述
    當(dāng)色譜柱使用較長(zhǎng)時(shí)間之后,就可能發(fā)生柱壓升、分離度不好、柱效降低、峰形不好等情況,這時(shí)就需要根據(jù)故障原因?qū)ιV柱進(jìn)行清堵與再生,以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。具體原因及處理方法如下:
    (1)篩板堵塞與柱頭塌陷:主要現(xiàn)象有柱壓嚴(yán)重升或不穩(wěn)定、色譜峰拖尾、色譜峰變寬、色譜峰分叉、禿峰等,需要進(jìn)行清堵與彈性復(fù)原處理。(此方法適合于任何類型有相同故障的色譜柱的處理,不同的是溶劑要與相應(yīng)類型色譜柱匹配。)
    主要處理方法如下:
    ①一般情況下,將色譜柱反接,不接檢測(cè)器,用純水或水-有機(jī)相(多用甲醇、乙腈)(95:5)以0.6ml/min流速?zèng)_洗約4h→再正向連接,接或不接檢測(cè)器,用純水或水-有機(jī)相(多用甲醇、乙腈)(95:5)以0.6ml/min流速?zèng)_洗約1h→再提流速至1.0ml/min沖洗1h,觀察柱壓變化。若不湊效,則擰開柱頭螺母(色譜柱進(jìn)口),小心取下篩板,用5%左右的硝酸溶液聲處理20min左右,再用純水聲20min左右。用小勺清理掉柱進(jìn)口污染的部分填料,再將用乙醇調(diào)和后的相應(yīng)的硅膠裝入柱入口(也可用已經(jīng)報(bào)廢的同類柱中的填料替代),用平面不銹鋼小鏟壓緊填平至略出柱管口,但量不宜太多,否則,壓得太緊柱壓會(huì)升,然后裝上清洗過(guò)的篩板,注意篩板安裝方向必需與原裝相同,后緊固。
    ②沖洗與飽和:清堵緊固后,反向連接色譜柱,不接檢測(cè)器,用純水或水-有機(jī)相(多用甲醇、乙腈)(95:5)以0.3ml/min流速?zèng)_洗約4h→再換成甲醇以0.5ml/min流速?zèng)_洗約2h →再正向連接色譜柱,接或不接檢測(cè)器,用純水或水-有機(jī)相(多用甲醇、乙腈)(95:5)以0.3ml/min流速?zèng)_洗約2h→再換成甲醇以0.5ml/min流速?zèng)_洗約1h→然后用甲醇或乙腈以1ml/min流速?zèng)_洗約1h以上,再根據(jù)測(cè)試用流動(dòng)相比例調(diào)整水-甲醇(或乙腈)比例,以1ml/min流速?zèng)_洗約1h,后用測(cè)試用流動(dòng)相平衡2h,進(jìn)樣測(cè)試即可。
    ③說(shuō)明:如不是情況,按其他辦法可行,則好不要反沖色譜柱和拆卸篩板。(2)柱效降低:主要特征性現(xiàn)象有柱壓基本正常,但出現(xiàn)拖尾峰、禿峰、分叉峰、前延峰、峰變寬、基線漂移、理論板數(shù)降低、分離度降低等。需要進(jìn)行再生處理,
    具體方法如下:
    ①一般情況下,順接色譜柱,按如下溶劑順序及條件沖洗:95%水-5%甲醇(或乙腈)(1.0ml/min,1h以上)→100%甲醇(1.0ml/min,1h以上)→100%乙晴(1.0ml/min,1h 以上)→75%乙晴-25%異丙醇(0.5ml/min,10倍柱體積以上)→100%異丙醇(0.5ml/min,10倍柱體積以上)→100%二氯甲烷(0.5ml/min,10倍柱體積以上)→100%正己烷(0.5ml/min,10倍柱體積以上,根據(jù)實(shí)際情況可忽略)→100%異丙醇(0.5ml/min,20倍柱體積以上)→95%水-5%甲醇(或乙腈)(0.5ml/min,30min;再升至1.0ml/min,10倍柱體積以上)→檢測(cè)用流動(dòng)相平衡2h或至基線平穩(wěn),進(jìn)樣測(cè)試。在沖洗過(guò)程中,隨時(shí)關(guān)注柱壓變化,確保不過(guò)4000psi;若出,可通過(guò)降低流速,升柱溫來(lái)調(diào)整,具體操作可咨詢具備相關(guān)知識(shí)背景和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的人士。
    ②若上述方法效果不理想,可按如上溶劑順序和條件,反接色譜柱沖洗→再順接色譜柱,用100%乙腈以1ml/min流速?zèng)_洗約2h→再用與流動(dòng)相同比例的水-有機(jī)相以1ml/min流速?zèng)_洗約30min→后用流動(dòng)相平衡2h或至基線平穩(wěn),進(jìn)樣測(cè)試即可。
    ③說(shuō)明:再生過(guò)程必須隨時(shí)關(guān)注柱壓變化,柱壓過(guò)易導(dǎo)致硅膠變形與開裂及鍵合相性端連接順序紊亂,同時(shí)要再生時(shí)間足夠。

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